Protease-Glo™ Assay (Protease-Glo™ 检测试剂盒) 是一种检测蛋白酶活性的新方法，该试剂盒采用一种经基因工程改造过的萤火虫(Photinus pyralis ) 萤光素酶，是GloSensor™ 平台技术的一个代表。该试剂盒使用一种环状序列突变的萤火虫萤光素酶，即GloSensor™ -10F 蛋白，该分子上带有蛋白酶的识别位点，可作为蛋白酶底物。使用该检测系统时，可通过分子克隆和偶联的转录/ 翻译无细胞表达系统快速产生蛋白酶底物，从而很容易对蛋白酶功能作出评估。实验时，需设计出对蛋白酶识别序列进行编码的寡核苷酸，并将其克隆至GloSensor™ -10F 基因上，后者位于线性载体上。然后，将包含目的蛋白酶位点的GloSensor™ 蛋白在无细胞表达系统中合成出来，随后作为蛋白酶底物使用。蛋白酶识别序列被剪切后，激活了GloSensor™ 蛋白，并产生发光。发光水平与蛋白酶活性具有相关性。Protease-Glo™检测试剂盒具有生物发光检测的优势：定量简单、灵敏度高，动态范围宽。

访问Protease-Glo™ Assay Design Tool ，了解如何在pGloSensor™ -10F 线性载体上创建您的目的蛋白酶识别位点，并使用无细胞翻译方法表达蛋白。

特点 - 优点

. 灵活性：可与要求P` 值的蛋白酶一同使用。

• 避免了荧光产生的背景问题：化学发光的物理和化学特性克服了荧光干扰所导致的问题。

• 灵敏度更高：发光容易实现，动态范围宽。

• 开放的平台系统：可创建您自己的蛋白酶识别底物。

• 可进行目的序列的评估：本系统是确定最佳蛋白酶识别序列或氨基酸置换效果的优秀工具。

• 网络应用：使寡核苷酸设计变得迅速且容易；仅需输入目的氨基酸序列即可。

应用

• 检测蛋白酶特异性或蛋白酶的识别序列。

• 比较某一种底物的相关蛋白酶（例如病毒株）。

• 测定蛋白酶底物特异性（主要序列长度，必需何种特定氨基酸）

• 筛选蛋白酶抑制剂，测定抑制剂的强度（IC50）

Figure 1. Overview of the Protease-Glo™ Assay protocol.

Figure 2. Modulation of firefly luciferase with a polypeptide linker between the N- and C-termini.

Panel A. New N- and C-termini were created to generate the GloSensor™ protein.Panel B. Insertion of a short polypeptide linker containing a protease recognition sequence greatly reduces luciferase activity. More details are available in the protocol.