pGEM® -T 载体多克隆区T 突出端的两侧均有BstZI 酶切位点，使用BstZI 单酶消化即可释放插入片段。也可选用适当的双酶消化释放插入片段。pGEM® -T载体系统II 除了pGEM® -T 载体系统I 所有成分外，还包括JM109 感受态细胞。
特点 - 优点
. 快速连接：使用2X 快速连接缓冲液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使连接反应在室温下1 小时内完成。
. 蓝/ 白筛选：pGEM® -T 载体包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶启动子，分别位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽编码区内多克隆位点的两侧。α - 肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。
. f1 复制起始位点：：可用于制备单链DNA。