HDAC-Glo™ I/II Assay 10ml G6420
HDAC-Glo™ I/II Assay 5 × 10ml G6421
HDAC-Glo™ I/II Assay 100ml G6422
HDAC-Glo™ I/II Screening System 10ml G6430
HDAC-Glo™ I/II Screening System 5 × 10ml G6431
氨基萤光素肽底物的去乙酰化可通过一个偶联的酶反应来检测；在这个反应中，显影试剂（Developer Reagent ）中的蛋白酶可将去乙酰化的肽从氨基萤光素底物上切除下来，释放的氨基萤光素可用 Ultra-Glo™ 重组萤火虫萤光素酶反应来定量。该检测法可在 15–45 分钟内完成，无需样品操作。HDAC 介导的发光信号持久，半衰期大于 3 个小时，可以用多孔板进行批量操作。 HDAC 检测试剂盒可广泛应用于第 I 类和第 II 类酶。
曲谷菌素 A（Trichostatin A）包含在 HDAC-Glo™ I/II 筛选系统内，也可以单独购买，是一种已知的泛 HDAC 抑制剂，可用作阳性对照抑制剂。曲谷菌素 A 以溶于 DMSO 中的 10mM 的溶液形式提供。
HeLa 细胞核提取物（HeLa Nuclear Extract），包含在 HDAC-Glo™ I/II 筛选系统内，也可以单独购买，可作为组蛋白去乙酰酶的活性来源。稀释的提取物也可用作 HDAC-Glo™I/II 检测试剂盒的对照。
HDAC-Glo™ I/II 对照底物只能单独购买，是 HDAC-Glo™ I/II 底物的非乙酰化形式，两者具有相同的氨基酸序列。HDAC-Glo™ I/II 对照底物可与 HDAC-Glo™ I/II 检测试剂盒及筛选系统一起使用，用于验证二级筛选中真实的 HDAC 抑制作用。对照底物以 10mM 的浓度提供；当与 HDAC-Glo™ I/II 检测试剂盒或筛选系统中的 HDAC-Glo™ 试剂一起使用时，在 96 孔板检测模式下，足够进行 480 次检测。
特点 - 优点
• 去乙酰化活性的简单检测方法：采用单试剂均质检测方法，操作步骤仅需加样 - 混合 - 检测，轻松用于从普通实验到筛选实验的各种实验。
• 灵敏度高：比荧光法灵敏度高 10-100 倍。
• 快速获得数据：仅需 15 分钟即可产生最大信号，辉光型信号持久稳定，使得该方法适用于高通量的自动化操作以及不带自动进样器的发光检测仪。
• 灵活选择样品类型：样品可来源于活细胞、细胞提取物或纯化的重组酶类。
应用
• 使用纯化酶、提取物或者直接在细胞培养板上使用细胞测定 HDAC 抑制剂的强度
• 使用纯化酶对 HDAC 抑制剂的描绘
• 通过同一孔内多重细胞活性检，建立 HDAC 抑制剂强度和细胞命运的关系
• 使用对照底物确认去乙酰化酶抑制作用
注意事项
G6420 对于 96 孔板能进行 100 次实验，每次 100μl；对于 384 孔板进行 400 次实验，每次 25μl。G6421 对于 96 孔板能进行 500 次实验，每次 100μl；对于 384 孔板进行 2,000 次实验，每次 25μl。G6422 对于 96 孔板能进行 1,000 次实验，每次 100μl；对于 384 孔板进行 4,000 次实验，每次 25μl。
G6430 对于 96 孔板能进行 100 次实验，每次 100μl；对于 384 孔板进行 400 次实验，每次 25μl。G6431 对于 96 孔板能进行 500 次实验，每次 100μl；对于 384 孔板进行 2,000 次实验，每次 25μl。
G6550 溶度为 10mM，在和 HDAC-Glo™ I/II Reagent 共用时能够在 96 孔板中进行 480 次实验。
Figure 1. HDAC-Glo™ I/II Assay chemistry.
Upon addition of a single reagent, HDAC activity deacetylates the luminogenic HDAC-Glo™ I/II Substrate, making the peptide sensitive to a specific proteolytic cleavage event that is mediated by the HDAC-Glo™ Reagent and liberates aminoluciferin. Free aminoluciferin then can be measured using the Ultra-Glo™ firefly luciferase reaction to produce a stable, persistent emission of light. All three enzymatic events occur in coupled, homogeneous, nearly simultaneous reactions upon addition of a single reagent and reach steady state in 15–45 minutes.
Figure 2. Overview of the HDAC-Glo™ Assay protocol.
Figure 3. Broad linearity with HDAC Class I and II enzymes.