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关于细胞培养的那点事

日期: 2021-09-26
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Q:什么是细胞培养?

A:细胞培养是指从动物或植物中取出细胞,然后使其在合适的人工环境中生长。这些细胞可于培养前直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离,或者也可来自已经建立的细胞系或细胞株。

原代培养

原代培养是指将细胞从组织中分离后,使其在合适的条件下增殖直到占据所有可用基质(即,达到汇合状态)的培养阶段。在此阶段,必须将细胞转移到新的容器中并更换新鲜培养基,从而对细胞进行传代培养,为其提供更多继续生长的空间。

细胞系

首次传代培养后,原代培养物即被称为细胞系或者亚克隆。来自于原代培养的细胞系寿命有限(即:有限细胞系),随着细胞的传代,生长能力强的细胞会占据优势最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。

细胞株

如果将细胞系的一个亚群通过克隆或者其他方法从培养物中明确地选择出来,则此细胞系就成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比,细胞株往往会获得其他一些遗传学改变。

Q:细胞的形态学分类有哪些?

A:根据形状和外观(即:形态)可将培养的细胞分为三大类:
1、成纤维细胞(或者成纤维细胞样细胞),为双极或多极细胞,呈细长形,贴附在基质上生长。
2、上皮样细胞呈多角形,尺寸更为规则,贴附在基质上呈散在斑片状生长。
3、淋巴母细胞样细胞,呈球形,通常悬浮生长,不贴附在基质表面。

Q:培养基的生物学污染有哪些类型,如何判断?

A:按照污染物来源,可分为细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。
1、细菌,是一类广泛存在的单细胞微生物,直径一般为几个微米,外形多样,如球状、杆状和螺旋状。培养物被细菌污染后,几天内即可通过简单的肉眼观察发现;被感染的培养物通常呈云雾状(即:浑浊状),有时表面会覆盖一层薄膜,并伴随pH的突然降低。在低倍显微镜下,细菌显示为在细胞之间移动的微小颗粒,在高倍显微镜下可以分辨细菌的形状。
2、酵母,是真菌界的一种单细胞真核微生物,大小从数微米到几十微米不等。与细菌污染类似,培养物被酵母污染后也会变得混浊,特别是污染后期。污染初期pH变化很小,后期污染严重时,pH会升高。在显微镜下,酵母成单个卵圆形或球形颗粒,有些会芽生出较小的颗粒。
3、霉菌,是真菌界的一种真核微生物,以被称为菌丝的多细胞丝状体形式生长。与酵母污染类似,毒菌污染初期培养物pH值会维持稳定,后期污染加重后pH值会迅速升高,导致培养物混浊。在显微镜下,菌丝体通常呈细束状纤维,有时呈较为密集的孢子团块。
4、病毒,是一种微观感染性物质,利用宿主细胞结构进行复制。病毒体积极小,因而要检测培养物中有无病毒以及将其从细胞培养实验室所用试刑中去除都十分困难。由于大多数病毒对宿主有非常严格的要求,因此一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响。但是,使用病毒感染的细胞培养物时却会对实验室工作人员造成严重的健康威胁,特别是当实验室培养的是人或灵长类动物细胞时。通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色、ELISA 实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞培养物的病毒污染。
5、支原体,是一种没有细胞壁的简单细菌,被认为是能够自我复制的最小的生物。由于体积极小(一般小于1微米),支原体的检测十分困难,除非其达到极高的密度,导致细胞培养物变质,在此之前往往没有明显的感染征象。有些生长缓慢的支原体可能会在培养物中持续存在,而不会导致细胞死亡,但是这些支原体会改变培养体系中宿主细胞的行为和代谢。慢性支原休感染的可能表现包括:细胞增殖速度降低、饱和密度下降以及悬浮培养物凝集,但是,唯一切实有效的检测支原体污染的方法就是采用荧光染色(例如· Hoechst 33258)、ELISA、PCR、免疫染色、放射自显影或者微生物学测定技术定期检测培养物。
交叉污染,虽然不如微生物污染普遍,但是许多细胞系与其他生长迅速的细胞系间广泛的交叉污染是一个明确的问题,会造成严重的后果。从声誉好的细胞库获取细胞系、定期检查细胞系的性质以及采用良好的无菌技术是有助于避免交叉污染的惯例方法。通过DNA指纹图谱、核型分析和同位素分析可以确认细胞培养物有无交叉污染。
 

Q:什么是基础培养基

A:大多数细胞系均可在基础培养基中生长良好,基础培养基中含有氨基酸、维生素、无机盐和碳源(如葡萄糖),但是这种基础培养基配方中必须添加血清。 

Q:复苏细胞的流程是怎样的?

A:1、将装有冷冻细胞的冻存管从液氮容器中取出,立即放入37℃水浴中。
2、在37℃水浴中轻轻转动冻存营,直到冻存管内仅剩余一小块冰芯,使细胞迅速解冻(一分钟内)。
3、将冻存管转移到层流通风橱内。打开盖子前,用70%乙醇擦拭冻存管外部。
4、将解冻的细胞逐滴转移到装有适量经过预热、适合该细胞系的完全生长培养基的离心管内。
5、以大约200×g的离心力将细胞悬液离心5-10分钟。实际离心速度和时间取决于细胞种类。
6、离心后,检查上清液是否清澈,有无完整的细胞沉淀。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
7、轻轻将细胞重新悬浮在完全生长培养基中,然后转移到合适的培养容器和推荐的培养环境。
 

Q:我的培养基是室温条件下运送来的,但注明应保存于冷藏条件下。这会有影响么?

A:我们会在常温下运输那些需要在冰箱中长期存放的培养基。我们对代表性的培养基配方进行了研究,结果表明这些培养基在室温下放置一周不会有问题。

京泽细胞培养基产品:

系列名称

产品名称

京泽货号

规格

DMEM培养基

高糖DMEM培养基,含L-谷氨酰胺和丙酮酸钠

GZ11995

500 mL

高糖DMEM培养基,不含L-谷氨酰胺和丙酮酸钠

GZ11960

500 mL

无糖DMEM培养基,含L-谷氨酰胺,不含丙酮酸钠

GZ11966

500 mL

低糖DMEM培养基,含L-谷氨酰胺和丙酮酸钠

GZ11885

500 mL

高糖DMEM培养基,含L一谷氨酰胺,不含丙酮酸钠

GZ11965

500 mL

高糖DMEM培养基,含L一谷氨酰胺和HEPES,不含丙酮酸钠

GZ12430

500 mL

高糖DMEM培养基,含L一谷氨酰胺和HEPES,无丙酮酸钠和酚红

GZ21063

500 mL

DMEM/F-12培养基

DMEM/F-12(1:1)培养基,含L一谷氨酰胺和HEPES

GZ11330

500 mL

DMEM/F-12(1:1)培养基,含L一谷氨酰胺,不含HEPES

GZ11320

500 mL

MEM培养基

MEM培养基,含Earle平衡盐和L一谷氨酰胺

GZ11095

500 mL

MEM a培养基,含L一谷氨酰胺,不含核苷和脱氧核苷

GZ12561

500 mL

MEM a培养基,含L一谷氨酰胺、核苷和脱氧核

GZ12571

500 mL

RPMI 1640培养基

RPMI 1640培养基,含L一谷氨酰胺

GZ11875

500 mL

RPMI 1640培养基,含L一谷氨酰胺和HEPES

GZ22400

500 mL

RPMI 1640培养基,含L一谷氨酰胺,不含酚红

GZ11835

500 mL

无糖RPMI 1640培养基,含L一谷氨酰胺

GZ11879

500 mL

Ham's F-12营养培养基

Ham's F一12营养培养基,含L一谷氨酰胺

GZ11765

500 mL

Ham's F一12 K营养培养基(Kaighn改良),含 L一谷氨酰胺

GZ21127

500 mL

其他培养基

IMDM培养基,含L一谷氨酰胺、内酮酸钠和 HEPES

GZ12440

500 mL

Leibovitz's L-1 5培养基,含L一谷氨酰胺

GZ11415

500 mL

McCoy s 5A培养基,含L一谷氨酰胺

GZ16600

500 mL

M199培养基,含L一谷氨酰胺

GZ11150

500 mL

细胞培养相关试剂-DPBS

Dulbecco's磷酸盐缓冲液(DPBS),不含钙、镁离子和酚红

GZ14190

500 mL

Dulbecco's磷酸盐缓冲液(DPBS),不含钙、镁离子和酚红,干粉

GZ21600

10 L

Dulbecco's磷酸盐缓冲液(DPBS) 10X,不含钙、镁离子和酚红

GZ14200

500 mL

细胞培养相关试剂-PBS

磷酸盐缓冲液(PBS),pH7.2

GZ20012

500 mL

磷酸盐缓冲液(PBS),pH7.4

GZ10010

500 mL

细胞培养相关试剂-HBSS

Hank's平衡盐溶液(HBSS) 含酚红,不含钙、镁离子

GZ14170

500 mL

Hank's平衡盐溶液(HBSS) 不含钙、镁离子和酚红

GZ14175

500 mL

细胞培养相关试剂-EBSS

Earle's平衡盐溶液(EBSS),不含钙、镁离子和酚红

GZ14155

500 mL




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