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Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

日期: 2017-05-22
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   细胞凋焦亡(pyroptosis)也被称作Caspase 1-依赖的细胞死亡,是近年来发现并证实的一种新的程序性细胞死亡方式,是机体在感知病原微生物浸染后启动的免疫防御反应(炎症反应),在拮抗和清除病原感染以及内源危险信号中发挥重要作用。过度的细胞焦亡会诱发多种自身炎症性和自身免疫性疾病。

    不同于细胞凋亡,pyroptotic细胞死亡的特征是渗透膨胀导致细胞增大和随后细胞膜的破裂,而线粒体膜保持完好。这导致促炎症因子的释放,如ATP,或蛋白质,能够招募中性粒细胞引起炎症的proIL-1a和HMGB1。

    由于pyroptosis在细胞形态改变、分子机制上的独特性,以及对机体免疫应答与炎性反应调控的重要性,它逐渐成为目前的研究热点。

    细胞焦亡主要特征为依赖于半胱天冬酶-1(caspase-1),并伴有大量促炎症因子的释放,快速启动机体天然免疫。天然免疫细胞通过形成炎性小体(Inflammasome)和将 Caspase-1 前体酶催化为 Caspase-1 的活性形式来应对病原体和其他危险信号。

    炎性小体是一种被不同炎性刺激而被诱导生成的蛋白复合体,根据诱导或刺激的不同,会产生不同的炎性小体,主要包括:NLRP1 inflammasome,NLRP3 inflammasome, AIM2 inflammasome,NLRC4 inflammasome等,但是这些不同的蛋白复合体的共同组分都包括caspase-1。炎性小体的组装,促进了Caspase-1的活化。Caspase-1的活化可引起的结果包括: 1)加工和释放细胞因子 IL-1β 、 IL-18 2)使质膜完整性破坏形成微小孔径,最终细胞发生快速的渗透性崩解,这是pyroptosis过程中细胞死亡的关键原因。

    事实上,炎性小体和炎性小体相关信号通路组分的基因突变与疾病密切相关,包括周期性发热综合征,白癜风,克罗恩病。 此外,特定疾病相关的刺激导致依赖炎性小体的IL-1β的生成,与痛风、假性痛风、石棉肺、矽肺病和阿尔茨海默氏症等疾病病理相关。但这其中的很多机制,并不十分明确,对这些疾病的治疗,仍然需要对炎性小体,Caspase-1的调控信号通路的进一步研究。

 Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay 检测系统是一种均质、生物发光检测方法,可选择性检测 Caspase-1 的活性。 Caspase-Glo® 1 炎性小体检测系统提供专门优化的Caspase-1底物Z-WEHD-aminoluciferin。一次性加入这种试剂后可引起细胞裂解,底物被 Caspase-1 剪切,然后被热稳定性的 Ultra-Glo™ 重组萤光素酶催化产生光信号。反应能够产生稳定的发光信号,与 caspase 活性成正比。(如下图) 

Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

优势:

减少手动操作时间: 可在多孔板模式下直接检测培养细胞或培养基中的 Caspase-1 活性。无需预裂解或多步移液的操作。
特异性检测 Caspase-1 活性: Caspase-1 的选择性底物(Z-WEHD) 和蛋白酶体抑制剂 (MG-132) 确保能够在细胞或培养基中直接检测 Caspase-1 活性。试剂盒中还提供了 Caspase-1特异性抑制剂用于作为平行对照
• 操作更加快速
: 加入 Caspase-Glo® 1 试剂后仅需 1h 即可检测光信号。与 Western blot 和 ELISA 相比,所需的时间更短。
仅检测具有催化活性的 Caspase-1: 功能性定量检测系统,能够准确分析酶功能的时间进程。
灵敏度高: 检测灵敏度高,可在多孔板细胞或培养基中检测Caspase-1 活性。
可灵活设定检测体积: 只需加入与样本孔培养基等体积的试剂,可轻松扩展到不同多孔板模式。
可批量操作: Caspase-1 的发光信号在 Caspase-Glo® 1 试剂中十分稳定 ( 半衰期 >3 小时 ),可在数小时内批量读取。无需带有进样器的发光检测仪。
可与其他检测系统兼容: 可在培养基中监测 Caspase-1 活性,同时样本还能用于其他检测。而且,在同一孔中进行可与其他化学成分兼容的检测试剂一起进行多重检测 ( 如 CellTox™ Green Cytotoxicity Assay)。


Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

在多种细胞和样品类型中检测Caspase-1 活性,满足您不同的实验需求

Caspase-Glo® 1 Assay 检测灵敏度高,可以用于检测在培养基或直接检测培养细胞中释放的caspase-1活性。实验详情请参考Technical Manual #456。

Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

YVAD-CHO抑制剂选择性抑制Caspase-1的活性,有效区分凋亡相关的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶。实验详情请参考Technical Manual #456。

 

Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

首次订购Caspase-Glo®1 Inflammasome Assay的“细胞焦亡”小伙伴,本来小麦打算送个烧烤架,让大家BBQ一下。但是考虑到环境问题,决定还是让大家Cool Down,安心实验,多多补水一下!

Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

 Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay

注:礼物可任选一种,活动截止2017.12.31

来源promega微信

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