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Promega新产品之实时凋亡&坏死检测系统

日期: 2017-11-16
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RealTime-Glo Annexin V Apoptosis and Necrosis Assay

是一种简单,非裂解性的实时监测凋亡进程的方法。无需多重多孔板,复杂的处理过程和特殊的检测仪器。只需具有发光和荧光检测的多功能读板仪即可。此方法的原理是检测磷脂酰丝氨酸(PS)膜外翻来检测凋亡和检测膜完整性的丧失来测定继发性坏死。通过一个简单的发光信号来检测Annexin V结合,通过一个荧光信号的检测来测定坏死。

产品优势

持续监测细胞状态的变化

此方法可实现在化合物处理的时候重复测定同一孔的不同时间点的发光和荧光信号来确定化合物的效力,从而比终点法使用更少的多孔板和检测试剂。

  • 适用于多种类型的培养细胞。

  • 可实时检测剂量依赖和时间依赖的凋亡进程。

  • 可与其他检测试剂叠加使用,从而获得更多的毒性发生机制的信息。

多孔板检测,检测通量可放大

由于试剂直接添加到培养细胞中,因此可以在微孔板中进行检测,无需要繁琐的清洗或处理步骤。

操作简单

简单的将检测试剂加入多孔板,然后反复读取即可。

 Promega新产品之实时凋亡&坏死检测系统原理:检测试剂中含有2个能与PS结合的Annexin V融合蛋白,分别带有NanoLuc luciferase Annexin V-LgBit和Annexin V-SmBiT的2个互补的结构域。同时还含有不能渗透入细胞膜的DNA染料。发光信号会保持在低水平直到PS外翻暴露,导致Annexin融合蛋白相互接近形成有功能的萤光素酶,从而光信号升高。荧光信号会在晚期凋亡阶段膜完整性丧失后才升高。

凋亡与坏死的区别

在化合物后的重复测定同一孔的不同时间点的发光和荧光信号,可揭示毒性刺激的效果并且定其作用机制

PS:Annexin V结合和膜完整性丧失出现的时间差显示凋亡的类型及其引发的继发性坏死。

Promega新产品之实时凋亡&坏死检测系统在化合物处理后依次重复检测发光信号(RLU)和荧光信号(RFU)。图A:DLD-1细胞以400ng/mL TRAIL处理;图B:以K562细胞处理1.1uM bortezomib

简要操作流程

 Promega新产品之实时凋亡&坏死检测系统50ul每孔4X终浓度凋亡抑制剂             加入等体积100ul 2X检测试剂                              孵育处理,重复检测发光和荧光信号

加入细胞多孔板

 Promega新产品之实时凋亡&坏死检测系统

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