HiBiT系列连环画- NanoLuc® 是谁？（一）
日期：
2018-07-05
浏览次数:
580
大龙虾，可生吃，可做汤；
小龙虾，可麻辣，可蒜香。
今天的故事我们首先要从餐桌上的虾讲起，说起来，虾这个家族为我们的餐桌文化可是做出了重大贡献。
然而最近科学家一种深海的小虾（学名Oplophorus gracilirostris）身上获得了一种个头很小的萤光素酶，经过工程处理之后，把它取名为NanoLuc。
要说到萤光素酶，就得谈谈两位萤光素酶界的老前辈——萤火虫（firefly）和海肾（renilla）萤光素酶，如果您恰好做过做过双萤光素酶报告基因检测，那么这两个名字肯定是记得非常清楚了。
和这两位前辈相比，新晋出道的NanoLuc有啥特点呢？
第一个特点就是——“小”！
和这位19kDa的小鲜肉比起来，61kDa的萤火虫萤光素酶和36kDa的海肾萤光素酶简直就是巨人一样的存在。
对于一个以发光为己任的萤光素酶来说，个头小有什么好处呢？
【1】 第一个作用就是可以用来做融合蛋白标签啦！由于萤火虫和海肾萤光素酶的个头太大，导致它们一直没法打入融合蛋白的市场。而NanoLuc的个头只有19kDa。比我们所熟悉的GFP融合蛋白（大约27kDa）还要小不少，所以萤光素酶家族终于可以头顶青天泪流满面的说：我终于可以做融合蛋白啦！
【2】 这个来自深海小龙虾的蛋白，在哺乳动物细胞中表达时，没有特殊的翻译后修饰或者奇葩的细胞内定位，表现异常稳定。而当作为报告基因来使用时，我们还可以通过加入一些降解序列，来降低其细胞内积累的本底，这样能够对于微妙的调控变化做出更加显著的响应。
【3】 由于这个蛋白个头很小，所以会玩的城里科学家们为它搞出了一个新的玩法——分泌型表达！只要为NanoLuc加上一段分泌序列，这个蛋白就会分泌到细胞外的培养环境中，在做报告基因检测时，我们可以无需裂解细胞，只需要抽取一定的培养上清即可进行检测，是不是更方便了呢？
说完了小的优点，就必须要介绍一下NanoLuc的最主要特点就是——亮！
这个亮度有多亮呢？我们看下面这个图表：
我们可以看到，相同数量的NanoLuc，发光的亮度要比萤火虫和海肾这两位前辈高出两个数量级！
拥有如此之高的亮度，最大的意义就是能为我们的实验提供无与伦比的灵敏度和检测限。
同时NanoLuc萤光素酶还有高达八个数量级的动态范围，远远高于荧光标记（4个数量级）和显色法（2个数量级），可以减少我们的预实验工作量。
在开发出NanoLuc萤光素酶之后，Promega就发布了一系列基于此技术的报告基因产品，包括了报告基因载体，单报告检测系统，以及和萤火虫萤光素酶合作的双报告检测系统。
那么关于NanoLuc的故事结束了吗？并没有！
接下来我们就要讲述一下基于NanoLuc发展而来的一个新技术——HiBiT！
摘自：普洛麦格微信公众号
Hot News
/
相关推荐
2020
-
06
-
09
点击次数:
86
细菌是一种具有侵略性的生物，它们已经进化出了一系列严酷的策略来杀死和抑制竞争对手。这些策略中最极端的一种是细胞主动分裂并死亡，以释放大量的毒素来杀死其他菌株。虽然我们知道一些细菌会这样做，但这种行为是否具有普遍性还不得而知。近日，发表在《Current Biology（当代生物学）》上的一项新研究中，来自英国牛津大学动物和生物化学系的研究人员发现，在细菌大战中，为了打败竞争对手，交战的细菌会进行大...
2019
-
12
-
25
点击次数:
104
电子显微镜下的假单胞菌细菌。图片来源：MPIIB / Volker Brinkmann近日，发表在《Science》上的一项研究中，来自德国马克斯·普朗克感染生物学研究所（MPIIB）的科学家们发现，人体具有一个特殊受体，它虽然不能识别细菌本身，但可以很好地监视细菌间的通信，持续监测感染动态，当有大量细菌存在以至于分泌出被称为毒力因子的致病物质时，该受体会向宿主发出调整免疫反应的信号。细...
2019
-
04
-
22
点击次数:
232
樱桃大小的“人造心脏”当地时间这周一，来自以色列特拉维夫大学的科学家们利用3D打印技术，造出一颗mini版“心脏”，更惊喜的是，这一“人工心脏”具有细胞、血管、心室和心房。虽然这一人工心脏很小，类似于兔子心脏的大小，但是科学家们希望沿着这一突破，未来有一天能够研发出适合临床移植的“人造心脏”，以及能够契合、修复有缺陷心脏的“补丁”。团队负责人Tal Dvir表示，过去已有3D打印心脏的尝试，但是并...
2019
-
04
-
10
点击次数:
94
大脑在睡眠过程中的各项活动可以加强生物的学习能力和记忆能力。在这个过程中，睡眠中的大脑可帮助人们记忆白天发生的事或学习到的知识技能，还可以选择性地记住或遗忘掉某些不想要的情感经历。 睡觉时还能记单词，不再只是梦想？！ 睡觉，可以说是人类一辈子当中，占据最多时间的事情了，普通人一生中有将近1/3的时间都是在睡眠中度过的。 然而在世界上，有少量人仅仅需要很少的睡眠时间，就...