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HiBiT 系列连环画:HiBiT—精致小标签的诞生(二)

日期: 2018-07-13
浏览次数: 397

HiBiT——精致小标签的诞生


故事首先还是要从NanoLuc说起,科学家发现,虽然NanoLuc很小,但是距离理想的蛋白融合标签,还是有一定的差距。

于是Promega的科学家绞尽脑汁想创造一个更小的蛋白融合标签,他们发现在第156和第157氨基酸的位置咔嚓一刀,可以将NanoLuc切成一大一小两个亚基(分别是11aa的小亚基,和156aa的大亚基LgBiT),这两个亚基分开时都不具有发光活性,但是组合起来之后,又能够恢复萤光素酶的活性


HiBiT 系列连环画:HiBiT—精致小标签的诞生(二)


HiBiT 系列连环画:HiBiT—精致小标签的诞生(二)


这就好像把插销插入电路一样,这个只有11aa的小亚基一旦和大亚基结合,就能够恢复萤光素酶的发光活力!


科学家对针大小亚基分别进行了一系列的突变改造,获得了多种亲和力强度的组合。


在这些组合中,科学家将亲和力最弱的改型组合命名为NanoBiT系统,专门用来研究蛋白之间的相互作用(这部分的内容可参看Annexin-V实时凋亡系统的介绍文章)。而亲和力最强的一对组合就是今天的主角:HiBiT系统!


一个标签的自我修养



怎样成为一个优秀的标签?

对于一个标签来说,首先它应该是很小,完美的融入到目标蛋白中,就像一个演员,他的表演他的塑造是为所扮演的角色和剧情所服务,而不能让自己的形象过于突兀。

HiBiT就是这样一个很袖珍的标签,它只有11个氨基酸的长度,几乎不会影响目标蛋白的正常功能。


那么标签太大会有什么后果呢?如果标签过大,很可能会影响与之融合蛋白的正常构象,以及对正常转运和功能产生影响,这样做出来的实验结果可能就会偏离真相哦,如果您在研究中有这方面顾虑的话,可以考虑一下HiBiT系统哦!



HiBiT 系列连环画:HiBiT—精致小标签的诞生(二)


HiBiT只有11个氨基酸大小,可以方便的构建到目标蛋白的N端、C端或者中间的任何位置,甚至不需要合成片段和繁复的剪切连接操作,只需要将相关序列设计到引物上进行克隆或者定点突变即可导入HiBiT片段。

当然你也可以直接购买方便即用的HiBiT空载体,Promega已经发布了一系列HiBiT载体,其中既包括了N端融合和C端融合的版本,也包括了胞内表达和带分泌序列的版本。

这些载体如今还有两套克隆方案可以选择,既有常规的多克隆位点(MCS)版本载体,也有基于方便可靠的Flexi克隆系统的版本。如果您的实验室之前就在使用Flexi系统,那么选择这个版本是最为方便的。


HiBiT 系列连环画:HiBiT—精致小标签的诞生(二)



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