HiBiT 系列连环画：HiBiT—精致小标签的诞生（二）
日期：
2018-07-13
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1361
故事首先还是要从NanoLuc说起，科学家发现，虽然NanoLuc很小，但是距离理想的蛋白融合标签，还是有一定的差距。
于是Promega的科学家绞尽脑汁想创造一个更小的蛋白融合标签，他们发现在第156和第157氨基酸的位置咔嚓一刀，可以将NanoLuc切成一大一小两个亚基（分别是11aa的小亚基，和156aa的大亚基LgBiT），这两个亚基分开时都不具有发光活性，但是组合起来之后，又能够恢复萤光素酶的活性！
这就好像把插销插入电路一样，这个只有11aa的小亚基一旦和大亚基结合，就能够恢复萤光素酶的发光活力！
科学家对针大小亚基分别进行了一系列的突变改造，获得了多种亲和力强度的组合。
在这些组合中，科学家将亲和力最弱的改型组合命名为NanoBiT系统，专门用来研究蛋白之间的相互作用（这部分的内容可参看Annexin-V实时凋亡系统的介绍文章）。而亲和力最强的一对组合就是今天的主角：HiBiT系统！
怎样成为一个优秀的标签？
对于一个标签来说，首先它应该是很小，完美的融入到目标蛋白中，就像一个演员，他的表演他的塑造是为所扮演的角色和剧情所服务，而不能让自己的形象过于突兀。
HiBiT就是这样一个很袖珍的标签，它只有11个氨基酸的长度，几乎不会影响目标蛋白的正常功能。
那么标签太大会有什么后果呢？如果标签过大，很可能会影响与之融合蛋白的正常构象，以及对正常转运和功能产生影响，这样做出来的实验结果可能就会偏离真相哦，如果您在研究中有这方面顾虑的话，可以考虑一下HiBiT系统哦！
HiBiT只有11个氨基酸大小，可以方便的构建到目标蛋白的N端、C端或者中间的任何位置，甚至不需要合成片段和繁复的剪切连接操作，只需要将相关序列设计到引物上进行克隆或者定点突变即可导入HiBiT片段。
当然你也可以直接购买方便即用的HiBiT空载体，Promega已经发布了一系列HiBiT载体，其中既包括了N端融合和C端融合的版本，也包括了胞内表达和带分泌序列的版本。
这些载体如今还有两套克隆方案可以选择，既有常规的多克隆位点（MCS）版本载体，也有基于方便可靠的Flexi克隆系统的版本。如果您的实验室之前就在使用Flexi系统，那么选择这个版本是最为方便的。
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