HiBiT系列连环画- HiBiT标签的检测方法简单到飞起（三）

那么有了融合标签之后，我们要如何进行定量检测呢？

HiBiT系统提供了三种灵活的方案，第一种就是快速方便的裂解检测方案。

裂解检测系统就是将细胞完全裂解后，试剂中的LgBiT亚基和融合蛋白上的HiBiT标签迅速结合，启动萤光素酶反应，发光的亮度就和细胞内的HiBiT标签多少成正比。

由于萤光素酶反应非常迅速，因此只需要五分钟就可以对样品内的融合蛋白进行迅速准确的定量。

第二种检测系统和Western Blot很像。电泳和转印之后，可以直接使用HiBiT印迹检测系统进行目标蛋白的亲和杂交，然后通过萤光素酶反应进行条带的发光检测。由于不需要封闭和抗体，相比Western Blot既省时又省力。

第三种检测方案是HiBiT胞外检测系统。这个系统专门为研究外泌蛋白或者细胞膜表面蛋白而设计。我们加入的试剂不含有裂解组分，其中的LgBiT只能和细胞膜表面或者分泌到培养基中的HiBiT蛋白结合，这种操作不裂解细胞，因此样品还可以进行其他的细胞分析和分子实验。

借助于CRISPR技术，我们在内源水平上对目标蛋白进行标签knock-in，如果实验室需要对某个蛋白进行调控机理的深入研究，那么获得一个CRISPR knock-in细胞系就是一个既时髦又可靠的操作。