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日期: 2018-09-03
浏览次数: 291

细胞毒检测-细胞实验的常规操作


从日常的化合物筛选、药效评估、代谢研究到ADCC,都离不开细胞毒性检测这个常规操作。


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经典靶标LDH


最早、最经典的细胞毒性靶标就是LDH


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LDH检测原理-偶联氧化还原反应


那么释放到细胞外的LDH是如何检测的呢?


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LDH显色检测的不足之处


首先,显色法的LDH检测灵敏度较低,对微量细胞毒性检测稍显无力。


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每次需吸取高达50ul也是个硬伤!



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较窄的线性范围对于实验操作来说也会带来麻烦。

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发光LDH检测给你全新的选择


Promega新推出LDH-Glo发光法细胞毒性检测系统,采用了与显色法相似的反应原理,在最后一步氧化还原反应中,不再使用四唑盐底物,而是使用了萤光素底物衍生物。


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由于发光法极高的灵敏度,显色法稍显无力的微量细胞检测也有了福音。

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与显色法动辄50ul的"豪放"取样量相比,发光法每次只需吸取2.5ul培养物,剩余的细胞可继续培养到更长的时间点,因此一份样品可以支持多次取样,节省了样品也避免了样品误差。

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由于每次取样量很少,不会影响剩余细胞的生长(培养体系减少至90%仍能正常生长),因此可很方便的兼容其他细胞分析手段,获得更多数据。

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操作简便


秉承了Promega发光法试剂盒"能简单绝不复杂"的理念,LDH-Glo试剂盒操作也是简单如一。将细胞与药物处理到规定时间点后取样,与LDH储存液混合稀释即可,稀释后的LDH样品既可以直接进入检测,也可以在-20℃或以下冻存后进行统一检测。


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LDH样品被LDH储存液稀释的比例需要根据实验的具体情况进行确定。参照下图图表,对于微量样本可以使用低稀释倍数以提高灵敏度,而如果样品中含有血清那么需要加大稀释倍数以对抗血清自带LDH的背景干扰。

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Promega推荐的稀释范围如下表,您可以以此为起点进行预实验确定最佳的稀释比例。

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应用广泛,尤其适合3D细胞培养


3D细胞微组织培养的健康分析一直缺乏有效的工具,LDH-Glo毒性检测的高灵敏度特性正好为3D微组织培养的细胞毒性研究提供了优秀的解决方案。


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LDH检测也是ADCC(抗体介导的细胞毒性作用)研究的重要毒性靶标,LDH-Glo自然也能在此类应用中大显身手。

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由于LDH的总数与细胞总数密切相关,因此可以使用LDH-Glo配合全细胞裂解来对细胞数目和增殖效果进行评估,这对于研究细胞增殖抑制作用的药物很有帮助。

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三花聚顶-总有一款适合你


在加入LDH-Glo补齐发光法之后,Promega的LDH检测试剂完全覆盖了显色、荧光和化学发光三大检测手段,您可以根据实验的要求或者硬件平台选择最合适的工具。


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