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细胞毒检测-细胞实验的常规操作从日常的化合物筛选、药效评估、代谢研究到ADCC,都离不开细胞毒性检测这个常规操作。经典靶标LDH最早、最经典的细胞毒性靶标就是LDHLDH检测原理-偶联氧化还原反应那么释放到细胞外的LDH是如何检测的呢?LDH显色检测的不足之处首先,显色法的LDH检测灵敏度较低,对微量细胞毒性检测稍显无力。每次需吸取高达50ul也是个硬伤!较窄的线性范围对于实验操作来说也会带来麻烦。发光LDH检测给你全新的选择Promega新推出LDH-Glo发光法细胞毒性检测系统,采用了与显色法相似的反应原理,在最后一步氧化还原反应中,不再使用四唑盐底物,而是使用了萤光素底物衍生物。由于发光法极高的灵敏度,显色法稍显无力的微量细胞检测也有了福音。与显色法动辄50ul的"豪放"取样量相比,发光法每次只需吸取2.5ul培养物,剩余的细胞可继续培养到更长的时间点,因此一份样品可以支持多次取样,节省了样品也避免了样品误差。由于每次取样量很少,不会影响剩余细胞的生长(培养体系减少至90%仍能正常生长),因此可很方便的兼容其他细胞分析手段,获得更多数据。操作简便秉承了Promega发光法试剂盒"能简单绝不复杂"的理念,LDH-Glo试剂盒操作也是简单如一。将细胞与药物处理到规定时间点后取样,与LDH储存液混合稀释即可,稀释后的LDH样品既可以直接进入检...
发布时间: 2018 - 09 - 03
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miRNA 研究背景miRNA 研究背景microRNA(miRNA) 广泛存在于真核细胞中,是内源性的具有调控功能的非编码RNA, 大小长约17~24 个核苷酸,能够形成RNA 诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC),主要通过碱基互补配对的方式结合靶mRNA的3’ 非翻译区(UTR) 的种子序列(miRNA 中介导靶序列结合的2-7 个核苷酸组成的小片段区域称为“seed sequence”种子序列),根据互补程度的不同降解靶mRNA 或者阻遏靶mRNA的翻译,使靶基因沉默。miRNA 研究方向miRNA 参与各种各样的调节途径,包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡等等。但到目前为止,只有一小部分miRNA 生物学功能得到阐明。miRNA也被用来作为一些疾病的标志物,甚至药物候选,miRNA的作用也在被世界各地的研究者不断揭示。今天,小麦就要给还在研究miRNA的科学家们推荐一款省时省力的miRNA研究工具——pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector, 方便易用的miRNA 靶基因验证载体。miRNA靶基因验证研究思路举例pmirGLO 技术原理及产品信息pmirGLO 报告基因检测技术:是由pmirGLO 载体,检测试剂及配套相关产品...
发布时间: 2018 - 08 - 06
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最近当大家为了”我不是药神”中的情节唏嘘不已的时候,CFDA已雷厉风行的批准了2个抗肿瘤药Opdivo及Keytruda,且2个药获批前后只差了1个月。而Keytruda从递交申请到7月份获批,其间仅用了不到半年的时间,创下中国进口抗肿瘤生物制剂最快审批记录。中国的肿瘤患者也迎来了福音。Keytruda中文名为”帕博利珠单抗注射液”,是默沙东生产的PD-1抑制剂,被誉为抗癌神药,也是第一个被批准的PD-1通路的单抗药物。作为曾治愈卡特总统的明星抗癌药,有人说PD-1抑制剂是最近十年,肿瘤治疗领域最大的突破:它打破了传统的癌症治疗模式,针对多种肿瘤都有效果,包括黑色素瘤,非小细胞肺癌,头颈癌,霍奇金淋巴瘤,膀胱癌,宫颈癌,胃癌,B细胞淋巴瘤等,有效率更高,副作用更小。目前在中国上市的主要适应症是黑色素瘤。更重要的是,PD-1抑制剂带来了横跨多个癌种的历史性突破:部分患者实现了长期生存,甚至实现了临床治愈,意味着部分晚期多发转移的肿瘤患者,可以活过5-10年。Keytruda的作用机理(图片来源:Keytruda官网)需要说明的是药物的研发与检测技术的发展是紧密伴行的。单抗药物的研发是需要可靠稳定的生物活性分析检测技术(Bioassay)来进行MOA机制的检测研发和质控,比如之前火爆一时的ADCC效应药物,在研发之初,由于没有稳定可靠的Bioassay来进行质控, 单抗药物研发一度受限...
发布时间: 2018 - 08 - 03
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Promega与寨卡病毒炎炎夏日,热浪席卷,暴雨频发,蚊蝇也猖獗繁盛了起来,不禁让小麦想起了一个蚊媒传播的病毒-寨卡病毒,这似乎已经是个过去时的话题,寨卡在引发了一阵恐慌后又淡出了人们的视线,但是受到寨卡病毒侵害的家庭却留下了永久的伤痛。现在让我们回望一下这个病毒的前世今生。作为一种蚊媒黄病毒,寨卡病毒通过受感染的伊蚊属蚊子,主要是热带地区的埃及伊蚊叮咬传播给人。伊蚊一般在白天叮咬,以清晨和傍晚/晚间为高峰期。这种蚊子也传播登革热、基孔肯雅热和黄热病。寨卡病毒还可能存在性传播。目前在调查其它传播方式,如通过输血传播等。寨卡病毒虽然是在前两年才引起关注,但是事实上1947年就已经通过一个黄热病监测网络首次在乌干达的猴子中发现。之后于1952年在乌干达和坦桑尼亚联合共和国的人类中间得到确认。目前非洲、美洲、亚洲和太平洋地区已记录过寨卡病毒病疫情。1960年代到1980年代,从非洲到亚洲都发现有人类感染,通常伴随轻微病症。出生和发育缺陷2007年雅浦岛(密克罗尼西亚联邦)报告了由寨卡病毒感染引起的第一次大规模疫情。2015年7月,巴西报告说寨卡病毒感染与吉兰–巴雷综合征之间存在关联。2015年10月,巴西再次报告说寨卡病毒感染与小头症之间存在关联。1寨卡病毒病的症状和体征寨卡病毒病的潜伏期(从接触到出现症状的时间)并不明确,但可能为几天。疾病症状与登革热等其它虫媒病毒感染类似,包括发热、...
发布时间: 2018 - 07 - 24
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