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在Promega40周年之际,为了让各位实验小伙伴们更充分的了解实验产品,更快的提高实验效率,节省宝贵的实验时间。            2018年7月18日,北京照生莱博联合Promega总部在302医院科讯楼8层全军中医药研究所成功举办了专题讲座。Promega--段博士主讲人:段文娟(博士)讲座时间:2018年7月18日  9:30-15:30讲座内容:1.细胞健康实时检测(免疫炎症、细胞死亡相关)                 2.细胞自噬检测                 3.PD-1/PD-L1活性阻断检测                 4.其他可供高通量筛选的工程细胞        Promega厂家技术专家段文娟博士为现场的老师、同学们做了非常专业、详尽的讲解,包括技术原理、涉及哪些实验、实验中如何使用以及解决了实验的哪些问题等等,不时有老师、同学提问,气氛十分活跃! ...
发布时间: 2018 - 07 - 24
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Promega与寨卡病毒炎炎夏日,热浪席卷,暴雨频发,蚊蝇也猖獗繁盛了起来,不禁让小麦想起了一个蚊媒传播的病毒-寨卡病毒,这似乎已经是个过去时的话题,寨卡在引发了一阵恐慌后又淡出了人们的视线,但是受到寨卡病毒侵害的家庭却留下了永久的伤痛。现在让我们回望一下这个病毒的前世今生。作为一种蚊媒黄病毒,寨卡病毒通过受感染的伊蚊属蚊子,主要是热带地区的埃及伊蚊叮咬传播给人。伊蚊一般在白天叮咬,以清晨和傍晚/晚间为高峰期。这种蚊子也传播登革热、基孔肯雅热和黄热病。寨卡病毒还可能存在性传播。目前在调查其它传播方式,如通过输血传播等。寨卡病毒虽然是在前两年才引起关注,但是事实上1947年就已经通过一个黄热病监测网络首次在乌干达的猴子中发现。之后于1952年在乌干达和坦桑尼亚联合共和国的人类中间得到确认。目前非洲、美洲、亚洲和太平洋地区已记录过寨卡病毒病疫情。1960年代到1980年代,从非洲到亚洲都发现有人类感染,通常伴随轻微病症。出生和发育缺陷2007年雅浦岛(密克罗尼西亚联邦)报告了由寨卡病毒感染引起的第一次大规模疫情。2015年7月,巴西报告说寨卡病毒感染与吉兰–巴雷综合征之间存在关联。2015年10月,巴西再次报告说寨卡病毒感染与小头症之间存在关联。1寨卡病毒病的症状和体征寨卡病毒病的潜伏期(从接触到出现症状的时间)并不明确,但可能为几天。疾病症状与登革热等其它虫媒病毒感染类似,包括发热、...
发布时间: 2018 - 07 - 24
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HiBiT标签的检测那么有了融合标签之后,我们要如何进行定量检测呢?HiBiT系统提供了三种灵活的方案,第一种就是快速方便的裂解检测方案。裂解检测系统就是将细胞完全裂解后,试剂中的LgBiT亚基和融合蛋白上的HiBiT标签迅速结合,启动萤光素酶反应,发光的亮度就和细胞内的HiBiT标签多少成正比。由于萤光素酶反应非常迅速,因此只需要五分钟就可以对样品内的融合蛋白进行迅速准确的定量。第二种检测系统和Western Blot很像。电泳和转印之后,可以直接使用HiBiT印迹检测系统进行目标蛋白的亲和杂交,然后通过萤光素酶反应进行条带的发光检测。由于不需要封闭和抗体,相比Western Blot既省时又省力。第三种检测方案是HiBiT胞外检测系统。这个系统专门为研究外泌蛋白或者细胞膜表面蛋白而设计。我们加入的试剂不含有裂解组分,其中的LgBiT只能和细胞膜表面或者分泌到培养基中的HiBiT蛋白结合,这种操作不裂解细胞,因此样品还可以进行其他的细胞分析和分子实验。与CRISPR双剑合璧在过去的蛋白重组表达中,研究人员通常会使用外源的蛋白表达载体在细胞内进行蛋白表达调控和功能的研究,这种手段简单直接,曾经为我们带来了很多宝贵的成果,但是这种外源表达有相当的局限性。下图是研究缺氧诱导条件下HiF1A蛋白的积累,我们可以看到,随着携带外源表达蛋白的瞬转质粒浓度的增加,同样的药物处理带来的蛋白表达响...
发布时间: 2018 - 07 - 20
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HiBiT——精致小标签的诞生故事首先还是要从NanoLuc说起,科学家发现,虽然NanoLuc很小,但是距离理想的蛋白融合标签,还是有一定的差距。于是Promega的科学家绞尽脑汁想创造一个更小的蛋白融合标签,他们发现在第156和第157氨基酸的位置咔嚓一刀,可以将NanoLuc切成一大一小两个亚基(分别是11aa的小亚基,和156aa的大亚基LgBiT),这两个亚基分开时都不具有发光活性,但是组合起来之后,又能够恢复萤光素酶的活性!这就好像把插销插入电路一样,这个只有11aa的小亚基一旦和大亚基结合,就能够恢复萤光素酶的发光活力!科学家对针大小亚基分别进行了一系列的突变改造,获得了多种亲和力强度的组合。在这些组合中,科学家将亲和力最弱的改型组合命名为NanoBiT系统,专门用来研究蛋白之间的相互作用(这部分的内容可参看Annexin-V实时凋亡系统的介绍文章)。而亲和力最强的一对组合就是今天的主角:HiBiT系统!一个标签的自我修养怎样成为一个优秀的标签?对于一个标签来说,首先它应该是很小,完美的融入到目标蛋白中,就像一个演员,他的表演他的塑造是为所扮演的角色和剧情所服务,而不能让自己的形象过于突兀。HiBiT就是这样一个很袖珍的标签,它只有11个氨基酸的长度,几乎不会影响目标蛋白的正常功能。那么标签太大会有什么后果呢?如果标签过大,很可能会影响与之融合蛋白的正常构象,以及对正...
发布时间: 2018 - 07 - 13
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