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HiBiT——精致小标签的诞生故事首先还是要从NanoLuc说起,科学家发现,虽然NanoLuc很小,但是距离理想的蛋白融合标签,还是有一定的差距。于是Promega的科学家绞尽脑汁想创造一个更小的蛋白融合标签,他们发现在第156和第157氨基酸的位置咔嚓一刀,可以将NanoLuc切成一大一小两个亚基(分别是11aa的小亚基,和156aa的大亚基LgBiT),这两个亚基分开时都不具有发光活性,但是组合起来之后,又能够恢复萤光素酶的活性!这就好像把插销插入电路一样,这个只有11aa的小亚基一旦和大亚基结合,就能够恢复萤光素酶的发光活力!科学家对针大小亚基分别进行了一系列的突变改造,获得了多种亲和力强度的组合。在这些组合中,科学家将亲和力最弱的改型组合命名为NanoBiT系统,专门用来研究蛋白之间的相互作用(这部分的内容可参看Annexin-V实时凋亡系统的介绍文章)。而亲和力最强的一对组合就是今天的主角:HiBiT系统!一个标签的自我修养怎样成为一个优秀的标签?对于一个标签来说,首先它应该是很小,完美的融入到目标蛋白中,就像一个演员,他的表演他的塑造是为所扮演的角色和剧情所服务,而不能让自己的形象过于突兀。HiBiT就是这样一个很袖珍的标签,它只有11个氨基酸的长度,几乎不会影响目标蛋白的正常功能。那么标签太大会有什么后果呢?如果标签过大,很可能会影响与之融合蛋白的正常构象,以及对正...
发布时间: 2018 - 07 - 13
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NanoLuc® 是谁?大龙虾,可生吃,可做汤;小龙虾,可麻辣,可蒜香。今天的故事我们首先要从餐桌上的虾讲起,说起来,虾这个家族为我们的餐桌文化可是做出了重大贡献。 然而最近科学家一种深海的小虾(学名Oplophorus gracilirostris)身上获得了一种个头很小的萤光素酶,经过工程处理之后,把它取名为NanoLuc。要说到萤光素酶,就得谈谈两位萤光素酶界的老前辈——萤火虫(firefly)和海肾(renilla)萤光素酶,如果您恰好做过做过双萤光素酶报告基因检测,那么这两个名字肯定是记得非常清楚了。和这两位前辈相比,新晋出道的NanoLuc有啥特点呢?第一个特点就是——“小”!和这位19kDa的小鲜肉比起来,61kDa的萤火虫萤光素酶和36kDa的海肾萤光素酶简直就是巨人一样的存在。对于一个以发光为己任的萤光素酶来说,个头小有什么好处呢?【1】     第一个作用就是可以用来做融合蛋白标签啦!由于萤火虫和海肾萤光素酶的个头太大,导致它们一直没法打入融合蛋白的市场。而NanoLuc的个头只有19kDa。比我们所熟悉的GFP融合蛋白(大约27kDa)还要小不少,所以萤光素酶家族终于可以头顶青天泪流满面的说:我终于可以做融合蛋白啦!【2】     这个来自深海小龙虾的...
发布时间: 2018 - 07 - 05
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Promega公司作为为生命科学产业提供创新型解决方案和技术支持的领导者。致力于提高全球范围内的科学家对基因组学、蛋白质组学、细胞分析、分子诊断和遗传鉴定等领域的认知。2018年6月26日-28日,Promega总部资深科学家Kevin携手技术专家段文娟博士成功在北京举办了三场技术讲座。第一场:6月26日 14:00-16:00,北京市清华清华同方科技广场D座(同方康泰)讲座内容:• Cell viability and death assays that includes real-time detection systems: Real-Time-Glo Annexin V Apoptosis and Necrosis Assay, and RealTime-Glo Cell Viability Assay• Epigenetic biochemical assay: Succinate-Glo, and MTase-Glo and its applications• Caspase-Glo? 1 Inflammasome Assay第二场:6月27日 12:00-13:00,北京市亦庄经济开发区泰河路6号(康龙化成)讲座内容:• AMP-Glo Bioluminescent Assay --- the applications and beyond   &...
发布时间: 2018 - 06 - 29
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Promega与大象研究                                                                                                                                         Virginia Pearson女士                        ...
发布时间: 2018 - 06 - 22
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